Isolasi dan Karakterisasi Protease Serupa Tripsin (PST) dari Lactobacillus plantarum FNCC 0270

Abstrak

Tripsin adalah suatu enzim yang penting baik untuk keperluan riset maupun industri farmasi, obat dan kesehatan, terutama untuk dikembangkan sebagai bahan baku enzim pencernaan. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan mengkarakterisasi protease serupa tripsin (PST) dari sumber yang belum banyak diteliti sebagai penghasil tripsin, yaitu Lactobacillus plantarum FNCC 0270. Fermentasi untuk mengisolasi PST dari L. plantarum FNCC 0270 telah dilakukan menggunakan fermentor LKB volume kerja 3,5 liter, pada suhu 37 oC, pH 8, agitasi 77 rpm dan aerasi 0,5 vvm. Komposisi media terdiri dari 3,64% baker yeast, 1,21% glukosa, 0,13% susu skim. Dari proses fermentasi tersebut dihasilkan aktivitas enzim sebesar 0,00129 U/mL, kadar protein 0,49 mg/mL. Pemurnian PST ini dilakukan dengan ultrafiltrasi Hollow Fiber Catridge 5 kD, pengendapan ammonium sulfat jenuh (30-70%), membran polyesthersulfone 30 kD dan kolom kromatografi penukar ion Q-XL dan kolom kromatografi afinitas HiTrap masing-masing memberikan peningkatan kemurnian terhadap PST kasar. Hasil analisis protein dengan SDS-PAGE PST menunjukkan adanya pita pada berat molekul setara dengan 47,35; 38,42; 21,40 dan 12,96 kD. PST hasil isolasi dapat stabil pada pH dan rentang suhu 25-35 oC, yaitu dengan waktu paruh yang tetap sama pada 693,2 menit. Nilai Km dan Vmaks dari PST masing-masing adalah 0,231 mM dan 0,001 U/mL menggunakan subtrat N-α-benzoyl-DL-arginin-p-nitroanilida. PST dihambat oleh EDTA, Ca2+, Zn2+, Mg2+, Mn2+ dan oleh substrat–substrat spesifik. Hasil karakterisasi PST dari L. plantarum FNCC 02700 dapat disimpulkan bahwa protease serupa tripsin (PST) adalah tripsin.